免疫組化檢查是通過抗原抗體反應(yīng)對組織或細(xì)胞中的特定抗原進(jìn)行定位和定量的病理學(xué)檢測技術(shù)，主要通過活檢或手術(shù)標(biāo)本切片完成。檢查流程包括標(biāo)本固定、切片制備、抗原修復(fù)、抗體孵育、顯色觀察等步驟。

1、標(biāo)本處理

活檢或手術(shù)切除的組織需立即用中性甲醛固定，防止抗原降解。病理科醫(yī)師對標(biāo)本進(jìn)行脫水、透明、浸蠟處理后，用切片機(jī)制成3-5微米厚的石蠟切片。部分特殊檢測需采用冰凍切片技術(shù)，將新鮮組織快速冷凍后切片，適用于需要保留酶活性或某些不穩(wěn)定抗原的檢測。

2、抗原修復(fù)

石蠟包埋過程會使蛋白質(zhì)交聯(lián)遮蔽抗原表位，需通過熱修復(fù)或酶消化處理。熱修復(fù)常用pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液高壓煮沸，酶消化多用胰蛋白酶或胃蛋白酶。選擇適當(dāng)?shù)男迯?fù)方法能顯著影響抗體與抗原的結(jié)合效率，需根據(jù)靶抗原特性調(diào)整。

3、抗體孵育

將一抗滴加在組織切片上，室溫或4℃孵育30分鐘至過夜。一抗多為單克隆抗體，如檢測ER、PR等激素受體常用鼠源單抗。隨后用PBS沖洗未結(jié)合抗體，再滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，形成抗原-抗體-酶標(biāo)復(fù)合物。

4、顯色觀察

加入二氨基聯(lián)苯胺顯色底物后，陽性部位會呈現(xiàn)棕色沉淀。也可選用堿性磷酸酶顯色系統(tǒng)產(chǎn)生紅色信號。在光學(xué)顯微鏡下觀察染色強(qiáng)度與分布模式，由病理醫(yī)師根據(jù)細(xì)胞膜、胞質(zhì)或核的著色情況判斷結(jié)果。部分實(shí)驗(yàn)室采用熒光標(biāo)記二抗，需用熒光顯微鏡觀察。

5、結(jié)果判讀

免疫組化結(jié)果需結(jié)合HE染色形態(tài)學(xué)綜合分析。半定量評分常用Allred評分系統(tǒng)乳腺癌激素受體或H-score強(qiáng)度×陽性細(xì)胞百分比。質(zhì)量控制需設(shè)立陽性對照和陰性對照，排除假陰性和假陽性干擾。特殊病例需進(jìn)行多種抗體組合檢測以提高診斷準(zhǔn)確性。

接受免疫組化檢查前應(yīng)避免使用影響檢測結(jié)果的藥物，如激素類藥物可能干擾ER/PR檢測。檢查后保持穿刺部位清潔干燥，出現(xiàn)紅腫熱痛需及時(shí)就醫(yī)。取報(bào)告時(shí)建議攜帶既往病理資料供對比參考，臨床醫(yī)師會結(jié)合免疫表型特征制定個(gè)體化治療方案。日常注意觀察相關(guān)癥狀變化，定期復(fù)查監(jiān)測病情進(jìn)展。